36.2.1 范围
本章规定了用亚甲蓝分光光度法测定城市污水中阴离子表面活性剂的方法。
36.2.1.1 测定范围
当采用10mm 比色皿，试料体积为100mL时，本方法最低检测浓度为0.05mg/L。
36.2.1.2 干扰
有机硫酸盐、磺酸盐、羧酸盐、酚类、硝酸盐和氯化物等均会引起正干扰，通过水溶液反洗可部分去除。
36.2.2 方法原理
阳离子染料亚甲蓝与阴离子表面活性剂作用，生成蓝色的离子对化合物，该生成物可被三氯甲烷萃取，用分光光度计在波长652nm 处测量三氯甲烷层的吸光度，所测得的吸光度与浓度成正比。
本方法测定的是样品中溶解态的阴离子表面活性剂。在测定前，应将水样预先经中速定性滤纸过滤以去除悬浮物。吸附在悬浮物上的表面活性剂不计在内。
36.2.3 试剂和材料
均使用分析纯试剂和蒸馏水，或具有同等纯度的水。
36.2.3.1 氢氧化钠：1mol/L，4g氢氧化钠溶解于1000mL蒸馏水中。
36.2.3.2 硫酸：0.5mol/L，2.78mL硫酸溶解于100mL蒸馏水中。
36.2.3.3 三氯甲烷 （CHCl3）。
36.2.3.4 十二烷基苯磺酸钠 （DBS） 贮备溶液：称取0.100g标准物 DBS（平均分子量344.4），准确至0.001g，溶于50mL水中，转移到100mL容量瓶中，稀释至标线并混匀。每毫升含1.00mgDBS。保存于4℃冰箱中，有效期为一星期。
36.2.3.5 十二烷基苯磺酸钠 （DBS） 标准溶液：准确吸取10.00mL十二烷基苯磺酸钠贮备溶液 （36.2.3.4），用水稀释至1000mL，每毫升含10.0μgDBS。当天配制。
36.2.3.6 亚甲蓝溶液：称取30mg亚甲蓝 （指示剂级），用50mL水溶解后也移入容量瓶，用水稀释至标准线，摇匀。此溶液贮存于棕色试剂瓶中。
36.2.3.7 洗涤液：称取50g一水磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O），溶于300mL水中，转移到1000mL容量瓶内，缓慢加入6.8mL浓硫酸（H2SO4，ρ＝1.84g/mL），用水稀释至标线，摇匀。
36.2.3.8 酚酞指示剂：将1.0g酚酞溶于50mL乙醇 [C2H5OH，95% （V+V）]，然后边搅拌边加入50mL水，滤去沉淀物。
36.2.3.9 玻璃棉或脱脂棉：将玻璃棉或脱脂棉放在索氏脂肪抽出器 （36.2.4.3）中用三氯甲烷提取4h后，取出干燥，保存在清洁的玻璃瓶中待用。
36.2.4 仪器
36.2.4.1 分光光度计。
36.2.4.2 250mL分液漏斗，最好用聚四氟乙烯 （PTFE）活塞。
36.2.4.3 索氏脂肪抽出器：150mL平底烧瓶，35mm×160mm抽出筒，蛇型冷凝管。
36.2.4.4 其他一般实验室仪器。
注：玻璃器皿在使用前先用水彻底清洗，然后用10% （m+m） 的乙醇盐酸溶液清洗，最后用蒸馏水冲洗干净。
36.2.5 样品
36.2.5.1 采集
实验样品应用事先经甲醇清洗过的清洁的玻璃瓶盛放。
36.2.5.2 保存
短期保存建议冷藏在4℃冰箱中，如果样品保存需超过24h，则应采取保护措施：保存期为4天，每1000mL样品中加入10mL40% （V+V） 甲醛溶液即可；保存期长达8天，则需用三氯甲烷饱和水样。
36.2.6 步骤
36.2.6.1 校准曲线
取一 组分液漏斗（36.2.4.2）10个，分别加入100mL、99mL、97mL、95mL、93mL、91mL、89mL、87mL、85mL和80mL水，然后分别移入0mL、1.00mL、3.00mL、5.00mL、7.00mL、9.00mL、11.0mL、13.0mL、15.0mL和20.0mL十二烷基苯磺酸钠标准溶液 （36.2.3.5），摇匀。按36.2.6.3处理每一标准，以测得的吸光度扣除试剂空白值 （零标准溶液的吸光度）后与相应的 DBS量 （μg）绘制校准曲线。
36.2.6.2 试份体积
为了直接分析水和废水样，应根据预计的阴离子表面活性物质的浓度选用试份体积，见表11。
表11 试份体积的选择 
36.2.6.3 测定
36.2.6.3.1 将所取试份移至分液漏斗中，以酚酞 （36.2.3.8） 为指示剂，逐滴加入1mol/L氢氧化钠溶液 （36.2.3.1）至水溶液呈桃红色，再滴加0.5mol/L硫酸（36.2.3.2）到桃红色刚好消失。
36.2.6.3.2 加入25mL亚甲蓝溶液（36.2.3.6），摇匀后再移入10mL三氯甲烷36.2.3.3），激烈振摇30s，注意放气。过分的摇匀会发生乳化，加入少量异丙醇 （小于10mL）可消除乳化现象。加相同体积的异丙醇至所有标准中，再慢慢旋转分液漏斗，使滞留在内壁上的三氯甲烷液珠降落。静置分层。
36.2.6.3.3 将三氯甲烷层放入预先盛有50mL洗涤液 （36.2.3.7） 的第二个分液漏斗，用数滴三氯甲烷 （36.2.3.3） 淋洗第一个分液漏斗的放液管。重复萃取三次，每次用10mL三氯甲烷 （36.2.3.3）。合并所有三氯甲烷至第二个分液漏斗中，激烈摇匀30s，静置分层。将三氯甲烷层通过玻璃棉或脱脂棉 （36.2.3.9），放入50mL容量瓶中。再用三氯甲烷 （36.2.3.3）萃取洗涤液两次 （每次用量5mL），此三氯甲烷层也放入容量瓶中，加三氯甲烷 （36.2.3.3）到标线。
注：如水相中蓝色变淡或消失，说明水样中亚甲蓝表面活性物质 （MBAS） 浓度超过了预计量，以致加入的亚甲蓝全部被反应掉。应弃去试样，另取一份较少量的试份重新分析。
36.2.6.3.4 每一批样品测定时都要做一次空白试验 （36.2.6.4）校准曲线 （36.2.6.1）。
36.2.6.3.5 在652nm 处，以三氯甲烷 （36.2.3.3） 为参比液，测定样品、校准溶液和空白试验的吸光度。以试份的吸光度减去空白试验 （36.2.6.4）的吸光度后，从校准曲线（36.2.6.1）上查得 DBS的质量。
36.2.6.3.6 空白试验
用100mL水代替试样按36.2.6.3的规定进行空白试验。在试验条件下每10mm 光程长空白试验的吸光度不应超过0.02，否则应仔细检查设备和试剂是否有污染。
36.2.7 分析结果的表述
用亚甲蓝活性物质 （MBAS）报告结果，以 DBS计，分子量为344.4。
式中 c——亚甲蓝活性物质的量，mg/L，以 DBS计；
m——从校准曲线上读取的 DBS质量，μg；
V——试份的体积，mL。
36.2.8 精密度和准确度
3个实验室分别对0.100mg/L、0.500mg/L、0.900mg/L三种不同浓度的阴离子表面活性剂标准样品进行了18次测定，方法相对误差置信范围为 （0.46±2.76）%。
3个实验室以废污水为本底进行了加标测定，回收率置信范围为 （95.6±5.5）%。
